两种早春短命植物CBF基因的原核表达分析

• 作者: 姚正培 张凯 张桦 曲延英
• 来源期刊: 新疆农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 绵果荠 卷果涩荠 CBF转录因子 原核表达
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 页码范围: 2016-2022
• 页数: 7页
• 分类号: Q945
• 字数: 5236字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6048/j.issn.1001-4330.2015.11.009

摘要

[目的]在原核表达系统中高效表达真核生物中与抗寒相关的转录因子CBF基因,验证序列的正确性,摸索高效表达的条件,为后续转录因子的功能验证奠定基础.[方法]以具有耐低温胁迫的两种早春短命植物绵果荠和卷果涩荠为材料,扩增两端有Nco Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点的LlCBF和MsCBF基因的CDS全长,构建原核表达载体pET32a-LlCBF和pET32a-MsCBF,并将其转入Rosetta(DE3)菌株,进行了15、25、30和37℃下不同IPTG浓度的诱导表达;选择表达量最大时的温度及IPTG浓度进行不同时间的诱导表达;对高效表达条件下收集的菌体沉淀超声破碎,离心后同时收集上清和沉淀并进行煮沸处理,SDS-PAGE电泳检测融合蛋白可溶性.[结果]LlCBF蛋白在30℃、IPTG浓度1 mmol/L、20h表达量达到最大,MsCBF蛋白在30℃、IPTG浓度2 mmol/L、20h达到最大表达量.[结论]探索出了在原核表达系统中高效表达目的蛋白的最适条件,LlCBF蛋白和MsCBF蛋白表达形式均为包涵体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曲延英	新疆农业大学农业生物技术实验室	135	726	13.0	19.0
2	张桦	新疆农业大学农业生物技术实验室	61	182	7.0	10.0
3	姚正培	新疆农业大学农业生物技术实验室	39	108	6.0	8.0
4	张凯	新疆农业大学农业生物技术实验室	26	120	6.0	10.0