番鸭呼肠孤病毒σNS蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

• 作者: 余深翼 吕小婷 吴宝成 吴异健 吴晓平 周五朵 崔龙萍 朱二鹏
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 番鸭呼肠孤病毒 σNS蛋白 原核表达 纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 474-480
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.4
• 语种: 中文

摘要

为制备番鸭呼肠孤病毒(MDRV) YB株σNS蛋白的多克隆抗体,首先经RT-PCR扩增了σNS基因的完整编码序列,并成功构建了重组表达质粒pET-YB-σNS.将其转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示成功高效表达出分子质量约为58 ku的融合蛋白.该融合蛋白以包涵体和可溶性蛋白两种形式存在,表达时的最佳诱导时间、IPTG诱导浓度、诱导温度分别为4h、1 mmol/L和37℃.通过对包涵体和可溶性蛋白进行尿素洗涤纯化和(或)Ni2+柱亲和层析纯化,得到了高纯度的重组蛋白.分别对纯化前、后的重组蛋白进行Western-blot分析,结果显示两者均可以与MDRV阳性血清发生特异性反应,表明它们具备良好的反应原性.将纯化后的可溶性σNS蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体ELISA效价达1∶32 000.上述研究结果为后续MDRV σNS蛋白功能研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴异健		42	134	8.0	10.0
2	吴宝成		42	507	11.0	22.0
3	周五朵		12	15	2.0	3.0
4	吴晓平		12	4	1.0	1.0
5	朱二鹏		13	8	1.0	2.0
6	吕小婷		3	1	1.0	1.0
7	余深翼		4	8	1.0	2.0
8	崔龙萍		2	0	0.0	0.0