猪流行性腹泻病毒COE基因的原核表达及其表达产物的生物活性分析

• 作者: 孙宝丽 曾喜多 曾志良 毕英佐 磨健悦 谢青梅 马静云 魏钟艳
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 COE基因 原核表达 生物活性
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 503-508
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文

摘要

为了获得猪流行性腹泻病毒(PEDV) COE基因在原核表达载体pET-32a(+)中的表达产物,并检测表达产物的生物活性,根据猪流行性腹泻病毒COE基因的全序列设计引物,以pCMV-PEDVCOE质粒作为模板,通过PCR扩增得到COE基因编码区的序列,将其克隆至含有6×His tag的原核表达载体pET-32a(+)中进行诱导表达.表达产物经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定,并用Ni-NTA亲和层析柱纯化,以此纯化产物为包被抗原建立了ELISA检测方法,并用该方法对39份感染PEDV猪血清进行了检测.结果显示,COE基因在大肠杆菌中经IPTG诱导表达,获得与预期分子质量相符的融合蛋白条带.经Western-blot检测,该蛋白能与Anti-PEDV单克隆抗体发生特异性反应.该融合蛋白纯化、复性后的质量浓度为0.7 mg/mL.采用以融合COE蛋白为包被抗原建立的ELISA对39份PEDV感染猪血清的检测结果都为阳性,说明该融合蛋白具备作为包被抗原建立ELISA抗体检测方法的潜力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	毕英佐		216	2631	28.0	41.0
2	马静云		87	548	13.0	19.0
3	谢青梅		112	510	12.0	17.0
4	孙宝丽		50	152	7.0	11.0
5	曾喜多		5	5	2.0	2.0
6	魏钟艳		2	2	1.0	1.0
7	磨健悦		2	0	0.0	0.0
8	曾志良		2	0	0.0	0.0