E. coliBL21 (DE3)/pET28a(+)-cr羰基还原酶分离纯化及酶学性质研究

• 作者: 吴配配 王亚军 罗希 郑裕国
• 来源期刊: 高校化学工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: R-羰基还原酶 分离纯化 6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯 (S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 生物化工
• 页码范围: 607-615
• 页数: 9页
• 分类号: Q814.1
• 字数: 6679字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-9015.2015.03.016

摘要

利用强酸型阳离子交换层析和疏水作用层析技术,从实验室构建的羰基还原酶工程菌E. coliBL21 (DE3)/pET28a(+)-cr细胞中分离得到电泳纯NADP(H)依赖型的羰基还原酶,LC-MS-QTOF分析揭示其相对分子质量为35.4 kDa.该酶能不对称还原 6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯 (CHOHB)、4-氯乙酰乙酸乙酯(COBE)合成阿托伐他汀关键手性合成子6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯、(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯,对丙酮酸乙酯、丁二酮也表现出较高的还原能力.该羰基还原酶的最适作用条件为:30℃,pH7.5;且活性不依赖于金属离子.它催化CHOHB还原反应的最大反应速度vmax 54.3μmol?mg?1?min?1,KmCHOHB值4.4 mmol?L?1;作用于COBE时,最大反应速度vmax 36.5μmol?mg?1?min?1,KmCOBE值1.2×10?1 mmol?L?1.E. coliBL21 (DE3)/pET28a(+)-cr羰基还原酶在他汀手性侧链制造上具有广阔的应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑裕国	浙江工业大学生物工程研究所	182	1210	17.0	26.0
3	王亚军	浙江工业大学生物工程研究所	28	91	6.0	7.0
5	罗希	浙江工业大学生物工程研究所	7	12	2.0	3.0
11	吴配配	浙江工业大学生物工程研究所	1	0	0.0	0.0