实时定量PCR法检测转基因CHO细胞中外源抗体轻重链基因的拷贝数

• 作者: 徐水清 薛建华 黄雪怡
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 实时定量PCR 转基因 CHO细胞 单克隆抗体 轻链 重链 基因拷贝数
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 523-527
• 分类号: Q789|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 建立实时定量PCR法检测转基因CHO细胞中外源抗体轻重链基因的拷贝数.方法 以分别带有抗体轻链和重链的质粒作为标准品,进行实时定量PCR反应,建立标准曲线.提取转染抗体轻重链基因的CHO细胞基因组DNA,进行定量PCR反应,通过标准曲线,再根据10 ng CHO基因组中含有的单拷贝基因的数量,分别计算得到抗体的轻链和重链基因在CHO细胞中的拷贝数.结果 分别建立了抗体轻链和重链基因的拷贝数标准曲线,标准曲线的相关系数均在0.99以上,PCR扩增效率分别为91.6％和91.8％,具有良好的特异性.随着细胞培养代次的增加,轻链基因和重链基因的拷贝数均出现降低的现象.结论 成功建立了实时定量PCR法检测转基因CHO细胞中外源抗体轻链和重链基因的拷贝数,可用于外源抗体基因在CHO细胞中的遗传稳定性研究,也为高表达细胞株的获得提供了一种检测方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐水清	嘉和生物药业有限公司上游工艺研发部	2	1	1.0	1.0
2	薛建华	嘉和生物药业有限公司上游工艺研发部	1	1	1.0	1.0
3	黄雪怡	嘉和生物药业有限公司上游工艺研发部	1	1	1.0	1.0