长QT综合征2型HERG基因绿色荧光真核表达载体的构建及表达

• 作者: 吕颖 孙超峰 李国良 武金娥 程功 蒋永荣 韩稳琦
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 遗传性长QT综合征 HERG基因 基因重组 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 心脏与心血管疾病
• 页码范围: 392-395,501-502
• 页数: 6页
• 分类号: Q782
• 字数: 3332字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13753/j.issn.1007-6611.2015.05.002

摘要

目的 构建先天性长QT综合征2型HERG基因绿色荧光真核表达载体pEGFP-C2-HERG,并检测其于活体细胞中表达及定位. 方法 采用限制性内切酶双酶切法和基因重组技术将HERG基因片段构建到真核表达载体pEGFP-C2中,通过琼脂糖凝胶电泳和DNA测序验证;构建成功的pEGFP-C2-HERG真核表达载体用脂质体转染法转染HEK293细胞后通过蛋白免疫印迹法再次鉴定重组蛋白的表达,并通过激光共聚焦显微镜观察其荧光蛋白表达及定位. 结果 琼脂糖凝胶电泳证实新构建的真核表达载体pEGFP-C2-HERG碱基大小正确,DNA测序提示HERG基因碱基序列与模板一致,新构建表达载体成功转染入HEK293细胞并于细胞膜上成功表达. 结论 成功构建pEGFP-C2-HERG真核表达载体,转染入HEK293细胞并于细胞膜上成功表达通道蛋白;此方法构建的表达绿色荧光的真核表达载体为药物筛查、突变型基因的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	程功	陕西省人民医院心内科	37	101	6.0	8.0
2	吕颖	陕西省人民医院心内科	4	7	2.0	2.0