中蜂囊状幼虫病毒VP1基因的优化表达及其免疫原性分析

• 作者: 万红霞 宋立先 张皓淳 曲祖乙 费东亮 钟义 马鸣潇
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 中蜂囊状幼虫病毒 VP1结构蛋白 原核表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 468-474
• 分类号: R373.2+4|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 原核表达优化的中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)的VP1基因,并分析其免疫原性.方法 根据大肠埃希菌密码子偏爱性对野生型CSBV VP1 (wtVP1)基因进行优化(optiVP1),将基因wtVP1和optiVP1分别克隆至pGEX-6P-1原核表达系统,构建原核表达质粒pGEX-6P-wtVP1和pGEX-6P-optiVP1,分别转化E.coli BL21,经IPTG诱导表达,并对诱导温度、IPTG终浓度及诱导时间进行优化,诱导蛋白经Western blot鉴定;重组蛋白经GSH-琼脂糖凝胶层析纯化;分别用PBS、纯化的GST标签蛋白、纯化的重组蛋白及CSBV纯化病毒免疫小鼠,经间接ELISA法检验各组小鼠的血清抗体效价.结果 优化后的VP1基因序列降低了密码子影响指数,提高了密码子适应指数;质粒pGEX-6P-wtVP1和pGEX-6P-optiVP1经鉴定证明构建正确;最佳诱导表达条件为:IPTG终浓度0.8 mmol/L,30℃,220 r/rin诱导8h;诱导表达蛋白占菌体总蛋白百分比由wtVP1菌株(5.49±0.30)％提高至optiVP1菌株(59.7±0.51)％,纯化后纯度可达0.5 mg/ml;兔抗GST标签抗体及兔抗CSBV血清均与优化后的重组蛋白发生特异性反应;重组蛋白组小鼠二免后可产生较高水平抗体,明显高于PBS组和GST标签蛋白组(P＜0.05).结论 通过密码子优化实现了CSBV结构基因VP1的高效表达,表达蛋白可诱导小鼠机体产生特异性抗体,具有良好的免疫原性,为探讨CSBV感染的分子发病机制和制备抗CSBV病毒的多克隆抗体奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	费东亮	辽宁医学院畜牧兽医学院	48	134	6.0	8.0
2	曲祖乙	辽宁医学院畜牧兽医学院	39	83	5.0	7.0
3	马鸣潇	辽宁医学院畜牧兽医学院	20	70	4.0	7.0
4	钟义	辽宁医学院畜牧兽医学院	2	4	2.0	2.0
5	张皓淳	辽宁医学院畜牧兽医学院	2	2	1.0	1.0
6	万红霞		2	4	2.0	2.0