重组人KNDC1腺病毒表达载体的构建及其促HUVEC衰老作用

• 作者: 李开济 林雅军 甄永占 章广玲 郝晓方 魏洁 魏静波
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 生物学
• 关键词: KNDC1 腺病毒 同源重组 脐静脉内皮细胞
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1447-1452
• 页数: 6页
• 分类号: Q782
• 字数: 3101字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人KNDC1腺病毒表达载体,观察其在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的表达及功能.方法 扩增KNDC1基因并与腺病毒骨架载体进行体外重组连接,经筛选、测序确认后转染进HEK293A细胞进行包装;按pAd-enoX试剂盒的步骤纯化重组腺病毒,通过终点稀释法测定病毒滴度;用pAdeno X-KNDC1感染HUVEC,48 h后用Western blot检测KNDC1蛋白表达水平;用SA-β-gal染色检测细胞衰老情况.结果 经测序确认目的基因KNDC1成功克隆入腺病毒载体中.转染HEK293A细胞后观察到细胞变圆、部分细胞漂浮的特征性病变效应,病毒滴度达到1×1011 PFU.感染了pAdeno X-KNDC1的HUVEC中KNDC1蛋白表达水平显著升高(P＜0.05).随着pAdenoX-KNDC1剂量的增加,衰老HUVEC数量增多.结论 人KNDC1腺病毒表达载体构建成功并能促进HUVEC衰老.