TNIP1真核表达载体的构建及表达

• 作者: 喻丽 李晓岚 李梅章 李金荣
• 来源期刊: 昆明医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: TNIP1蛋白 HeLa细胞 基因克隆 表达
• 年，卷（期）: 2015,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 38-42,47
• 页数: 6页
• 分类号: R34
• 字数: 4317字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建肿瘤坏死因子α诱导蛋白3相互作用蛋白1 (TNIP1)真核表达载体(pEGFP-N3-TNIP1),观察了解外源TNIP1蛋白的细胞内定位及其在HeLa细胞中的表达.方法 应用RT-PCR从人外周血淋巴细胞中扩增TNIP1基因的开放阅读框(ORF),将目的片段亚克隆入pEGFP-N3中,筛选阳性克隆,提取质粒测序进行鉴定.将表达质粒转染HeLa细胞,荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的表达与定位,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹分别从mRNA水平和蛋白水平来检测TNIP1在HeLa细胞中的表达情况.MTT实验检测细胞增殖情况、流式细胞仪检测细胞周期.结果 重组质粒双酶切鉴定,在1.9 kb左右有明显的条带,DNA测序结果证实重组质粒pEGFP-N3-TNIP1中含有的目的基因片段与GenBank上登录号为BC0 14008.1的TNIP1基因序列完全一致;荧光倒置显微镜观察重组质粒转染HeLa细胞后有绿色荧光蛋白的表达,转染48 h后通过qRT-PCR和Western blot分别检测到TNIP1mRNA和蛋白质的表达,均较对照明显升高,外源性的TNIP1蛋白主要定位于细胞质中.结论 成功构建了pEGFP-N3-TNIP1真核表达载体,外源表达的TNIP1蛋白主要分布于HeLa细胞的细胞质部分,过表达TNIP1蛋白不影响HeLa细胞的细胞周期及细胞生长存活.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李梅章	云南大学生命科学院生物化学和分子生物学实验室	4	6	1.0	2.0
2	李金荣	昆明医科大学第二附属医院泌尿外科	2	1	1.0	1.0