重组质粒pmCherry-WT-hERG和pEGFP-E637K-hERG的构建及其在细胞内的表达和定位

• 作者: 廉姜芳 杨曦 黄晓燕
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 先天性长QT综合征 HERG基因 E637K突变体 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 分子诊断与基因检测
• 页码范围: 1216-1219
• 页数: 4页
• 分类号: R541.1
• 语种: 中文

摘要

目的 分别构建先天性长QT综合征(LQTS)相关HERG基因和E637K突变基因与红色和绿色荧光蛋白基因的融合表达载体pmCherry-WT-hERG和pEGFP-E637K-hERG,观察其在细胞内的表达和定位情况.方法 将克隆在pcDNA3上的HERG和E637K片段分别亚克隆到红色荧光蛋白载体pmCherry-C2和绿色荧光蛋白载体pEGFP-C1上,转染HEK293T细胞,24 h后利用western blot技术和荧光显微镜观察重组质粒蛋白表达和细胞内定位情况.结果 重组质粒经酶切、PCR和测序鉴定正确无误.转染pmCherry-WT-hERG野生型质粒的细胞可以检测到135 kD和155 kD 2条蛋白质条带,而转染pEGFP-E637K-hERG突变型质粒的细胞仅显示1条135 kD蛋白质条带,155 kD处条带缺失.融合蛋白发出的红色和绿色荧光表明,突变型蛋白分布于胞浆中,而野生型蛋白主要位于胞膜上.结论 成功构建了pmCherry-WT-hERG和pEGFP-E637K-hERG不同荧光蛋白融合表达载体,并在真核细胞中得到有效表达,为LQTS突变基因的进一步功能研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	廉姜芳		22	85	5.0	8.0
2	黄晓燕		8	38	4.0	6.0
3	杨曦		7	12	2.0	3.0