通过CRISPR-Cas9系统敲减PAEC中GGTA1和CMAH基因的效果检测

• 作者: 牟丽莎 白图雅 蔡志明 谢崇伟
• 来源期刊: 深圳中西医结合杂志
• 学科: 医学
• 关键词: GGTA1 CMAH CRISPR-Cas9 PAEC 单克隆细胞
• 年，卷（期）: 2015,（22）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-3,封3
• 分类号: R-332|Q754
• 语种: 中文
• DOI: 10.16458/j.cnki.1007-0893.2015.22.001

摘要

目的:检测由短回文重复序列(CRISPR)-Cas9系统敲减猪动脉内皮细胞(PAEC)中基因α1,3半乳糖基转移酶(GGTA1)和CMP-N-乙酰神经氨酸羟化酶(CMAH)的效果.方法:通过CRISPR-Cas9系统,用已设计好的GGTA1和CMAH基因的guide RNA (gRNA)构建质粒,以慢病毒为载体包装病毒和感染PAEC,对成功感染的细胞进行单克隆培养并挑选收集单克隆细胞,提取细胞基因组,进行PCR,琼脂糖凝胶电泳,退火、酶切,测序等方法对GGTA1和CMAH基因敲减的效果进行检测.结果:对单克隆细胞进行选择性测序,选择V2-g-a1、V2-c-b1、V2-c-d4单克隆细胞测序结果分别为:V2-g-a1细胞基因组突变位点在第205位V2-c-b1细胞基因组突变位点在第240位;V2-c-d4细胞基因组突变位点在第246位.结论:CRISPR-Cas9系统成功构建质粒,完成慢病毒包装和感染细胞,成功敲减目的基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	牟丽莎		5	3	1.0	1.0
2	谢崇伟		4	3	1.0	1.0
3	蔡志明		5	3	1.0	1.0
4	白图雅		2	2	1.0	1.0