上皮膜蛋白1真核表达载体的构建及其对人舌鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

• 作者: 代晓华 张军 李燕妮 王冠华 连小丽 邹慧儒 颜艳
• 来源期刊: 华西口腔医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 上皮膜蛋白1 舌鳞状细胞癌细胞 载体 转染 细胞迁移 细胞侵袭
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 口腔肿瘤学专栏
• 页码范围: 398-403
• 页数: 6页
• 分类号: R73
• 字数: 4747字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7518/hxkq.2016.04.016

摘要

目的：构建上皮膜蛋白1（EMP1）基因真核表达载体pEGFP-N1-EMP1，探讨EMP1基因对人舌鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响。方法采用逆转录聚合酶链式反应（PCR）扩增EMP1基因，双酶切法连接至真核表达载体pEGFP-N1双酶切产物大片段，构建pEGFP-N1-EMP1重组质粒。经测序鉴定后，通过脂质体介导法将pEGFP-N1-EMP1重组质粒和pEGFP-N1空载体转染至人舌鳞状细胞癌Tb3.1细胞，荧光显微镜下观察转染后绿色荧光蛋白的表达情况，实时荧光定量PCR法检测转染后24、48、72 h的EMP1过表达水平。利用Transwell迁移及侵袭实验分析EMP1过表达对Tb3.1细胞迁移及侵袭能力的影响。结果成功克隆EMP1全长基因，经测序分析证实将EMP1基因准确插入真核表达载体pEGFP-N1，转染后细胞可见绿色荧光表达。实时荧光定量PCR结果显示，pEGFP-N1-EMP1重组质粒转染24 h组，Tb3.1细胞中EMP1表达量显著高于pEGFP-N1空载体组、野生型细胞组以及重组质粒转染48 h和72 h组。Transwell迁移及侵袭实验结果显示，EMP1过表达抑制了Tb3.1细胞的迁移和侵袭能力。结论成功构建了EMP1真核表达载体，并在体外证实了EMP1过表达可抑制舌鳞状细胞癌细胞的迁移和侵袭能力，为进一步研究EMP1基因在口腔鳞状细胞癌转移中的作用及其分子机制奠定了基础。