突变敏感性分子开关检测线粒体DNA A1555G位点的条件优化

• 作者: 周晶 彭华 董巍檑 郭紫芬 陈方方 龚咏晴
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 突变敏感性分子开关 氨基糖苷类耳聋 线粒体DNA 高保真聚合酶
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 临床检验技术研究
• 页码范围: 161-164
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3652字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13602/j.cnki.jcls.2016.03.01

摘要

目的 对高保真酶介导的突变敏感性分子开关技术检测线粒体DNA(mtDNA) A1555G位点条件进行优化.方法 利用3'硫代磷酸化修饰的突变型引物和野生型引物作为下游引物,在其上游设计一条公共引物分别构成突变引物对和野生引物对,以构建好的包含mtDNA A1555G位点的突变型质粒和野生型质粒为模板,进行高保真聚合酶介导的双向引物延伸反应,对PCR体系中的退火温度、引物浓度、模板浓度等条件优化,通过凝胶成像系统对其PCR结果进行分析确定最佳反应条件.结果 分子开关技术检测mtDNA A1555G位点的最佳PCR条件:退火温度为61.0℃,引物浓度为0.6 μmol/L,检测模板浓度为103～106 copies/μL.结论 确定了分子开关技术检测mtDNA A1555G位点的最佳反应条件,为该技术在线粒体DNA的突变筛查中的应用提供依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	彭华	南华大学药物药理研究所	13	37	4.0	6.0
2	郭紫芬	南华大学药物药理研究所	32	133	7.0	9.0
3	陈方方	南华大学药物药理研究所	6	40	5.0	6.0
4	周晶	南华大学药物药理研究所	7	9	2.0	3.0
5	董巍檑	南华大学附属第一医院妇产科	7	14	3.0	3.0
6	龚咏晴	南华大学药物药理研究所	4	9	2.0	3.0