猪圆环病毒2型 Rep 基因真核表达载体的构建和免疫原性分析

• 作者: 于宗幸 刘成倩 孙晓云 易建中 李红 王静 陈磊
• 来源期刊: 上海农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪圆环病毒 2 型 Rep 基因 真核表达载体 间接免疫荧光
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 6-9
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65
• 字数: 2650字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15955/j.issn1000-3924.2016.01.02

摘要

根据 GenBank 发表的猪圆环病毒2型（PCV2）基因序列设计并合成1对特异性引物，进行 PCR 扩增，从 PCV2突变株中扩增出 PCV2 Rep 基因，对 PCR 扩增产物清洁后进行双酶切，连接到 pEGFP-C1载体上，转化到大肠杆菌 DH5α感受态细胞中，经 PCR 筛选和测序后鉴定出正确的重组基因，完成真核表达载体的构建。将重组质粒转染到 PK15细胞中，收取病毒液抽提 DNA，PCR 检测到 Rep 基因，证明转染是成功的。进行间接免疫荧光试验，可以检测 Rep 基因在 PK15细胞中的表达，试验结果很好的验证了 Rep 基因的免疫原性。这为进一步研究 PCV2的生物学活性及 PCV2新型疫苗奠定了坚实的基础。