鲑鱼甲病毒阳性核酸物质制备及RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 刘敏 唐丽杰 宋傲臣 李一经 杜航 蒋烨 高帅
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鲑鱼甲病毒 SAVE2 核酸物质 RT-PCR 检测方法
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 页码范围: 56-62
• 页数: 7页
• 分类号: S942.3
• 字数: 4151字
• 语种: 中文

摘要

为建立快速检测鲑鱼甲病毒(Salmonid alphavirus,SAV)RT-PCR方法,根据GenBank公布的E2基因序列(1 375 bp)设计引物,扩增SAV E2全长基因,利用假病毒制备技术获得包裹E2核酸物质(RNA)的SAV假病毒溶液.以SAV假病毒作为阳性核酸物质质控品,以E2F:5' CCG-TTG-CGG-CCA-CAC-TGG-ATG 3’,E2R:5'CCT-CAT-AGG-TGA-TCG-ACG-GCA-G 3'为引物,优化反应条件,建立SAV的RT-PCR检测方法.结果表明,该方法可扩增SAV E2特异性516 bp的DNA片段,引物最适反应浓度为1.0μmol·L-1,最佳退火温度为57.5℃,对SAV的三种亚型SAV1 (V4640)、SAV2(V4619)、SAV5(V4638)检测结果均为阳性,对SVCV、IHNV和IPNV的PCR扩增结果均为阴性;并确定对SAV的核酸最低检出量达1.59 pg;以RT-PCR方法在不同时间对每份样品作3次重复检测,检测结果一致.表明此方法特异性强,敏感性高,稳定性和重复性较好,可用于SAV临床诊断和检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李一经	东北农业大学动物医学学院	219	1679	20.0	27.0
2	唐丽杰	东北农业大学动物医学学院	90	615	13.0	20.0
3	刘敏	东北农业大学动物科学与技术学院	57	476	12.0	20.0
4	杜航	东北农业大学动物科学与技术学院	2	3	1.0	1.0
5	宋傲臣	东北农业大学动物科学与技术学院	2	3	1.0	1.0
6	高帅	东北农业大学动物科学与技术学院	2	3	1.0	1.0
7	蒋烨	东北农业大学动物科学与技术学院	2	3	1.0	1.0