人TR基因真核表达载体的构建

• 作者: 叶棋浓 姜丽娜 林佳佳 熊加秀 程龙 营孙阳 麦洪旭
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 端粒酶 hTR 基因克隆 真核表达
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 137-141,165
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 5073字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2016.02.015

摘要

目的 构建人端粒酶RNA组分( hTR)的真核表达载体,并对其生物学功能进行初步检测. 方法 以人胚肾293 T细胞RNA逆转录得到的cDNA为模板,采用PCR技术扩增出hTR编码序列,将其插入到pCDNA 3 .0载体中;将重组质粒与空载体分别转染293T细胞,实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qRT-PCR)检测其表达情况,在HepG2细胞中构建此基因的稳定细胞系并用qRT-PCR检测其效果,通过RNA结合免疫共沉淀( RIP )实验验证其和人端粒酶逆转录酶( hTERT )及角化不良蛋白( dyskerin )的相互作用,通过端粒酶重复序列扩增技术( telomerase repeat amplification protocol ,TRAP)检测过表达hTR后HepG2细胞的端粒酶活性. 结果 双酶切和测序结果表明,pCDNA3.0-hTR的真核表达载体构建成功;转染293T细胞用qRT-PCR证明成功表达;qRT-PCR证实HepG2 pCDNA3.0-hTR稳定细胞系筛选成功;RIP实验证实了hTR与hTERT和角化不良蛋白之间存在相互作用;TRAP实验发现过表达hTR并不影响HepG2细胞的端粒酶活性. 结论 成功构建了pCDNA 3.0-hTR真核表达载体,为进一步研究以针对hTR为靶标的癌症治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶棋浓	军事医学科学院生物工程研究所	138	519	11.0	17.0
2	程龙	军事医学科学院生物工程研究所	26	79	4.0	8.0
3	营孙阳	军事医学科学院生物工程研究所	5	19	1.0	4.0
4	熊加秀	军事医学科学院生物工程研究所	2	19	1.0	2.0
5	麦洪旭	军事医学科学院生物工程研究所	2	19	1.0	2.0
6	林佳佳	军事医学科学院生物工程研究所	3	19	1.0	3.0
7	姜丽娜	军事医学科学院生物工程研究所	4	25	2.0	4.0