产气肠杆菌组成型启动子的筛选及其活性测定

• 作者: 井敏敏 井申荣 仉秋实 刘志成 岳风先 张成 毛小琴 汪玉婷 苑荣亮
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 产气肠杆菌 组成型启动子 蛋白表达 活性测定
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 203-207
• 页数: 5页
• 分类号: R378.2
• 字数: 3060字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2016.04.004

摘要

目的：从产气肠杆菌基因组中筛选组成型启动子，并检测其活性。方法用Sau3 AⅠ限制性内切酶将产气杆菌的基因组酶切到500 bp大小，连接到pCMR8 a载体上，转化DH5α感受态后涂布氯霉素和卡那抗生素的双抗平板上筛选启动子，经SDS－PAGE分析启动子的蛋白表达能力，筛选较强启动子并对其进行截短和顺反性实验，最后利用截短启动子表达不同的蛋白。结果成功筛选到了5个启动子序列，获得到了表达能力最强启动子的截短核心序列，验证了其具有反向启动外源蛋白表达的能力，成功表达了其他外源蛋白。结论本实验通过大肠埃希菌表达系统成功的筛选并验证了产气杆菌的一种组成型启动子，具有较强的启动外源蛋白表达能力，对工业上蛋白的生产及实验室表达某种蛋白具有重要意义。