毕赤酵母组成型高效表达启动子的筛选鉴定

• 作者: 朱利泉 江均平 王凤忠 石义超
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 葡萄糖氧化酶 巴氏毕赤酵母 启动子pGCW14 组成型表达
• 年，卷（期）: 2018,（13）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 110-116
• 页数: 7页
• 分类号: TS201.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2018.13.021

摘要

为获得高产量、高活性的葡萄糖氧化酶(GOD)酵母表达菌株,优化了GOD的T132S/T56V双突变编码序列,将之克隆到表达载体pGAPk上得到表达载体pGAPk-h2-GOD,以pGAP启动GOD基因的表达.将pGAPk-h2-GOD上的pGAP启动子替换为pGCW14和pAOX1,并对pGCW14启动子进行改造,得到3种pGCW14的改造体,最终得到包括pGAPk-h2-GOD在内的6种不同启动子的重组表达载体.将这6种载体转化毕赤酵母GS115,建立了一种简便高效的筛选方法初步筛选出GOD重组菌株,再对筛选到的转化子进行发酵培养,测定发酵上清液的GOD酶活力,以此来比较各种启动子启动效率的强弱.结果显示:pGCW14的启动效率是pGAP的3～5倍,改造后的启动子pGCW14+ G20A/C-467T(0.767)和pGCW14-UA(0.689)的启动效率较原始的pGCW14(0.574)都有明显的提高,尤其pGCW14+ G20A/C-467T启动效率最高,比原始pGCW14提高了32.5％左右.与诱导型启动子pAOX1 (1.187)相比,pGCW14+ G20A/C-467T(1.109)的启动效率仅比其低6.6％左右.结论:改造后的启动子可望在毕赤酵母组成型高效表达的研究应用中具有一定的前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	江均平	中国农业科学院农产品加工研究所	20	117	7.0	9.0
2	朱利泉	西南大学农学与生物科技学院	66	505	13.0	19.0
3	王凤忠	中国农业科学院农产品加工研究所	71	376	10.0	16.0
4	石义超	西南大学农学与生物科技学院	1	4	1.0	1.0