重组大肠杆菌多基因串联表达合成反式-4-羟基-L-脯氨酸

• 作者: 叶勤 李志敏 盛花开 衣玉兰
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组大肠杆菌 重叠PCR 无缝组装 反式-4-羟基-L-脯氨酸
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 开发与应用
• 页码范围: 81-86
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2016.01.015

摘要

[目的]得到表达多个基因的重组大肠杆菌,以期实现葡萄糖为碳源生产反式-4-羟基-L-脯氨酸.[方法]以菌液为模板,PCR得到不同来源的proB、proA、proC、p4h基因,重叠PCR串联相邻基因,所得片段通过无缝组装与pET-28a载体连接,并在大肠杆菌BL21中表达,筛选阳性表达菌株,电泳及测序验证,重组菌在30 ml MCG培养基摇瓶中发酵,分光光度法和HPLC检测产量.[结果]0.5 mmol/L IPTG诱导24h,5组串联基因成功在大肠杆菌中表达,并以葡萄糖为碳源,获得产物反式-4-羟基-L-脯氨酸,培养基不添加L-脯氨酸时E.coli BL21/pET-28a-BAH-Hbs、E.coli BL21/pET-28a-HBACkp和E.coli BL21/pET-28a-HBAmg产量达到0.28 g/L、0.16 g/L和0.29 g/L,添加4 mmol/L的L-脯氨酸时,分别为0.64 g/L、0.55 g/L和0.74 g/L.[结论]proB、proA、proC及p4h基因成功在大肠杆菌中表达,5株重组菌在30℃摇瓶中诱导表达24 h得到产物反式-4-羟基-L-脯氨酸,其中E.coli BL21/pET-28a-HBAmg产量达到0.74g/L,为今后在发酵罐中生产奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李志敏		42	120	6.0	8.0
2	叶勤		85	660	15.0	21.0
3	盛花开		1	0	0.0	0.0
4	衣玉兰		1	0	0.0	0.0