无外源脯氨酸发酵产反式-4-羟脯氨酸重组大肠杆菌的构建及发酵优化

• 作者: 周邦炜 孙付保 张震宇 王付才 胡丹丹
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 脯氨酸4-羟化酶 反式-4-羟脯氨酸 L-脯氨酸 谷氨酸激酶 共表达
• 年，卷（期）: 2015,（20）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 168-174
• 分类号: TS201.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2015.20.027

摘要

为实现无外源脯氨酸的条件下直接从葡萄糖转化生成反式-4-羟脯氨酸,本实验采用定点突变和基因共表达的方法构建重组大肠杆菌:首先对L-脯氨酸生物合成途径中的关键酶谷氨酸激酶进行定点突变E143A、K145A,以增强L-脯氨酸生物合成能力;然后引入脯氨酸4-羟化酶基因,通过两个基因的共表达可以实现从葡萄糖到反式-4-羟脯氨酸的连续转化,而不再需要添加外源L-脯氨酸.得到的L-脯氨酸生物合成能力增强的菌株在摇瓶阶段L-脯氨酸的产量可达到1.4 g/L;proBA2与hyp双基因共表达菌株的反式-4-羟脯氨酸产量为98.9 mg/L,比原始菌株提高了一倍,经发酵优化后得到培养基为:葡萄糖10g/L,胰蛋白胨15 g/L,硫酸亚铁3 mmol/L,硫酸镁1 g/L,磷酸氢二钾3g/L,氯化钙0.015 g/L,在这个培养条件下反式-4-羟脯氨酸的产量为220.0 mg/L,比优化前提高1.2倍.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张震宇	江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室和糖化学与生物技术教育部重点实验室	18	41	3.0	6.0
2	孙付保	江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室和糖化学与生物技术教育部重点实验室	20	41	4.0	5.0
3	王付才	江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室和糖化学与生物技术教育部重点实验室	2	4	1.0	2.0
4	胡丹丹	江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室和糖化学与生物技术教育部重点实验室	1	1	1.0	1.0