S100A6基因过表达慢病毒载体的构建、转染及鉴定

• 作者: 南岩东 叶欣 吴大方 李洁 胡进 马力天
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 慢病毒载体 A549细胞 S100A6基因
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 127-131
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3636字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13753/j.issn.1007-6611.2016.02.006

摘要

目的 构建S100A6基因重组慢病毒质粒,经293T细胞包装为重组慢病毒颗粒,并感染A549细胞,实现在细胞中高效、稳定表达. 方法 PCR扩增S100A6基因序列,将目的基因与酶切线性化载体pLenO-DCE定向连接,转化E.Coli DH5α感受态细胞,对阳性重组子进行DNA测序及比对.将构建成功的目的质粒和辅助包装质粒共转染293T细胞生产病毒液,荧光显微镜观察报告基因在293T细胞中的荧光表达,判断重组慢病毒的感染效率.用得到的病毒液转染人肺腺癌A549细胞,real-time PCR和Western blot检测转染A549细胞后S100A6蛋白和S100A6 mRNA的表达. 结果 测序提示重组慢病毒质粒构建成功;荧光显微镜观察显示在包装细胞中获得较高的转染效率.real-time PCR检测显示A549细胞中有S100A6 mRNA表达;Western blot显示S100A6蛋白在A549细胞中稳定表达. 结论 成功构建S100A6基因慢病毒表达载体,并成功感染A549细胞,实现在细胞中高效、稳定表达,为S100A6基因功能及特性的研究和探索提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	南岩东	第四军医大学唐都医院呼吸与危重症医学科	34	245	9.0	14.0
2	李洁	解放军第451医院内分泌科	48	168	8.0	11.0
3	吴大方	解放军第451医院内分泌科	43	191	8.0	11.0
4	叶欣	解放军第451医院内分泌科	5	11	2.0	3.0