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摘要:
xylB基因失活可以降低木酮糖的磷酸化,使木糖还原为木糖醇而不进入PPP途径.利用Red重组技术构建xylB缺失大肠杆菌△xylB/E.coli BL21(DE3)可以提高木糖醇的产率.通过PCR克隆得到来自Neurospora crassa的木糖还原酶基因xr,将该基因与载体pET30a(+)连接构建表达质粒pET30a-xr;PCR克隆得到来自E.coli K-12的6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-phosphogluconate dehydrogenase,6-PGDH)基因gnd和葡萄糖6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PDH)基因zwf,依次与双启动子原核表达载体pCDFDute-l连接构建表达质粒pCDFDuet-gnd-zwf;将上述构建好的两个重组质粒同时转化到△xylB/E.coli BL21(DE3)宿主体内.经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达获得分子量约为38、51、54 kD的三种蛋白,酶活测定显示,重组菌种XR的比酶活为7.25 U·mg-1,6-PGDH的比酶活为2.26 U·mg-1,G6PDH的比酶活为1.31 U·mg-1.5L发酵罐发酵结果显示,xylB基因敲除可以提高木糖醇的产率,含NADPH再生系统的菌株木糖醇的体积产率是1.04 g·(L·h)-1,比只含有木糖还原酶的重组菌株0.88 g·(L·h)-1高24.32%,为后续工业化利用大肠杆菌生产木糖醇奠定了基础.
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内容分析
关键词云
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文献信息
篇名 重组大肠杆菌的构建及利用木糖生产木糖醇的研究
来源期刊 高校化学工程学报 学科 生物学
关键词 xylB基因 xr基因 grid基因 zwf基因 木糖醇
年,卷(期) 2016,(4) 所属期刊栏目 生物化工
研究方向 页码范围 864-870
页数 7页 分类号 Q786
字数 4743字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1003-9015.2016.04.018
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研究主题发展历程
节点文献
xylB基因
xr基因
grid基因
zwf基因
木糖醇
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
高校化学工程学报
双月刊
1003-9015
33-1141/TQ
大16开
杭州 浙江大学玉泉校区化学工程与生物工程学系
1986
chi
出版文献量(篇)
3841
总下载数(次)
3
总被引数(次)
32754
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:the National Natural Science Foundation of China
官方网址:http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:数理科学
论文1v1指导