毛果杨中链酰基辅酶A合成酶的克隆及酶学分析

• 作者: 张强 撖静宜 曹山 李丽红 李慧 王莹 蒋璐瑶 要笑云 陆海
• 来源期刊: 北京林业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 毛果杨 MACS 克隆 原核表达 酶学分析
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: 林 学 Forest Sciences
• 页码范围: 9-15
• 页数: 7页
• 分类号: S718.43
• 语种: 中文
• DOI: 10.13332/j.1000-1522.20160121

摘要

中链酰基辅酶A合成酶( MACS)属于腺苷酸合成酶超基因家族,催化中链脂肪酸与辅酶A结合形成相应的中链酰基辅酶A。本研究通过同源检索毛果杨基因组数据库中的4CL基因,克隆得到毛果杨PtMACS1的基因序列(基因编号：estExt fgenesh4 pg. c 640066)。通过序列分析可知,Box I和Box II两个在4CL中保守的结构域在该蛋白中并不保守。将PtMACS1与原核表达载体 pET-30a(+)构建融合表达载体PtMACS1- pET-30a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导重组蛋白进行表达。镍柱纯化重组蛋白后进行酶学活性分析,研究结果表明该蛋白对中链脂肪酸己酸、壬酸、癸酸显示出明显活性：Kcat分别为(130±2.65)、(193±3.46)、(201±5.51)μmol/( min·mg),以该蛋白的最适底物癸酸测得该蛋白的最适反应温度为37℃,最适反应pH为7.0。该结果表明,PtMACS1属于毛果杨中链酰基辅酶A合成酶家族一员,为后续毛果杨腺苷酸合成酶超基因家族的鉴定及分类分析提供资料。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王莹	北京林业大学生物科学与技术学院	20	139	6.0	11.0
2	陆海	北京林业大学生物科学与技术学院	69	729	14.0	24.0
3	张强	北京林业大学生物科学与技术学院	29	354	10.0	18.0
4	李慧	北京林业大学生物科学与技术学院	55	290	8.0	16.0
5	曹山	北京林业大学生物科学与技术学院	4	10	2.0	3.0
6	蒋璐瑶	北京林业大学生物科学与技术学院	4	6	2.0	2.0
7	李丽红	北京林业大学生物科学与技术学院	6	11	2.0	3.0
8	要笑云	北京林业大学生物科学与技术学院	5	6	2.0	2.0
9	撖静宜	北京林业大学生物科学与技术学院	3	2	1.0	1.0