快速构建多重sgRNA载体利用CRISPR/Cas9技术敲除拟南芥IAA2基因

• 作者: 丁晓辉 刘丁源 朱睦元 李苗苗 王君晖 邱婷
• 来源期刊: 遗传
• 关键词: CRISPR/Cas9 多重sgRNA串联 基因组编辑 IAA2基因
• 年，卷（期）: 2016,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 756-764
• 页数: 9页
• 字数: 5588字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16288/j.yczz.16-002

摘要

IAA2(Indole Acetic Acid2)是拟南芥Aux/IAA生长素响应基因大家族中的一员,目前还没有它的突变体的报道,阻碍了对其功能和作用机制的深入研究.在CRISPR/Cas9基因组编辑技术中,1个sgRNA只能靶向基因的1个位点,有时基因敲除的效率并不高.为了提高敲除效率,本文在Golden-Gate克隆技术的基础上,通过两轮PCR扩增,将每3个sgRNA串联到同1个入门载体中,再将入门载体与含Cas9表达框的目标载体LR反应,获得最终的表达载体.结果表明,设计的6个sgRNA有4个发挥了作用,产生了碱基插入突变和大片段缺失突变等多种可遗传的突变.与单个sgRNA相比,多重sgRNA的基因敲除效率高、种系突变多;与其他构建多重sgRNA载体的方法相比,本方法具有快速、高效等优点.本文所得到的5个突变体为后续的IAA2功能研究提供了良好的材料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱睦元	浙江大学生命科学学院	86	1750	26.0	38.0
2	王君晖	浙江大学生命科学学院	27	514	12.0	22.0
3	邱婷	浙江大学生命科学学院	2	16	1.0	2.0
4	丁晓辉	浙江大学生命科学学院	5	17	1.0	4.0
5	刘丁源	浙江大学生命科学学院	1	15	1.0	1.0
6	李苗苗	浙江大学生命科学学院	1	15	1.0	1.0