拟南芥Ib bHLH家族基因CRISPR/Cas9敲除载体的构建

• 作者: 樊玲玲 韩毅 马铭悦
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 拟南芥 IbBHLH家族基因 载体构建 CRISPR/Cas9
• 年，卷（期）: 2019,（19）
• 所属期刊栏目: 动物科学·生物技术
• 页码范围: 118-120,151
• 页数: 4页
• 分类号: Q945.78
• 字数: 2760字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2019.19.035

摘要

[目的]全氟辛酸(PFOA)处理能显著诱导拟南芥Ib bHLH(Ib basic helix-loop-helix)家族4个转录因子bHLH38、bHLH39、bHLH100和bHLH101的转录水平.为了进一步分析这4个基因在响应PFOA中的潜在作用,利用CRISPR/Cas9技术构建了它们的共敲除载体.[方法]以野生型拟南芥基因中的外显子为模板,设计引物,通过两步PCR扩增法将靶向基因连接到CRISPR/Cas9载体上;将构建成功的重组质粒转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中,挑取阳性菌落,PCR鉴定正确后,将其质粒转入农杆菌GV3101感受态细胞中,再次挑取阳性菌落进行PCR鉴定正确后,提取质粒进行表达盒测序.[结果]通过两步PCR扩增法,成功将4个靶点表达盒转入到CRISPR/Cas9载体中,构建了bHLH38、bHLH39、bHLH100和bHLH101的双元CRISPR/Cas9敲除载体.[结论]成功构建的Ib BHLH家族CRISPR/Cas9敲除载体,为后续拟南芥Ib BHLH家族四突突变体材料的获得提供了可用性载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩毅	合肥工业大学食品与生物工程学院	4	1	1.0	1.0
2	樊玲玲	合肥工业大学食品与生物工程学院	1	0	0.0	0.0
3	马铭悦	合肥工业大学食品与生物工程学院	1	0	0.0	0.0