肠炎沙门菌肽脯氨酰顺反异构酶SlyD的基因敲除、表达及酶学特征

• 作者: 安树敏 朱姗姗 潘志明 焦扬 焦新安 耿士忠 薛颖 费晓 郭荣显
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: 肠炎沙门菌 SlyD蛋白 基因敲除 肽脯氨酰顺反异构酶
• 年，卷（期）: 2016,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1282-1290
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20150519

摘要

[目的]以肠炎沙门菌肽脯氨酰顺反异构酶SlyD为对象,构建基因缺失株及表达纯化该蛋白,为研究其在肠炎沙门菌致病性与应激等方面的作用奠定基础.[方法]参考GenBank登录的肠炎沙门菌基因组序列设计用于slyD基因敲除及原核表达的特异引物,运用自杀质粒介导的同源重组技术对肠炎沙门菌C50041 slyD基因进行敲除,构建C50041△slyD缺失株;原核表达SlyD蛋白,通过α-糜蛋白酶耦联法对其PPIase活性进行测定;利用生物信息学相关软件,分析SlyD蛋白的氨基酸序列及功能域.[结果]PCR鉴定与测序结果证明成功构建了肠炎沙门菌C50041△slyD缺失株,其生长特性与野生株基本一致;SDS-PAGE及PPIase活性分析表明,获得了具有生物活性的可溶性SlyD蛋白;生物信息学分析显示SlyD蛋白由FKBP样肽脯氨酰顺反异构酶结构域、分子伴侣功能域和金属结合区域3个功能区域组成.[结论]成功获得了肠炎沙门菌C50041△slyD缺失株和具有PPIase活性的重组SlyD蛋白.