大鼠HO-1基因重组慢病毒载体的构建及在骨髓间充质干细胞中的表达

• 作者: 汪文婧 田光 陈旭昕 韩志海
• 来源期刊: 国际呼吸杂志
• 关键词: 急性肺损伤 慢病毒 血红素加氧酶-1 骨髓间充质干细胞
• 年，卷（期）: 2016,（14）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1071-1075
• 页数: 5页
• 字数: 3542字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-436X.2016.14.008

摘要

目的 构建大鼠血红素加氧酶1 (HO-1)基因重组慢病毒载体lenti EGFP-HO-1,并检测其在骨髓间充质干细胞(BMSC)中的表达效率.方法 利用聚合酶链反应技术(PCR)扩增rat-HO-1基因,并克隆到pGV287 EGFP载体中,行PCR及测序鉴定所构建的重组质粒pGV287-EGFP-HO-1;将重组质粒pGV287-EGFP-HO-1及辅助包装质粒pHelper 1.0、pHelper 1.0共转染293细胞进行重组慢病毒lenti-EGFP HO-1的包装,并采用荧光标记法检测病毒滴度,再进一步感染BMSC,荧光显微镜下观察感染效果、Western blot检测BMSC内HO-1表达情况.结果 大鼠HO-1基因扩增产物大小为911 bp,与目的基因相关片段中HO1 cDNA大小一致.阳性克隆行PCR后形成498 bp,其大小与目的片段大鼠HO-1 cDNA相当,进一步测序鉴定提示与GenBank信息库中rat-HO-1基因mRNA一致.重组慢病毒lenti-GV287-EGFP-HO1滴度为2×108 TU/ml,感染BMSC后可观察到报告基因EGFP表达,慢病毒lenti-GV287-EGFP-HO-1感染组中可检测到HO-1蛋白表达.结论 本研究成功构建了重组慢病毒载体lenti-GV287-EGFP-HO-1,并能够在BMSC中高效表达,为进一步探索HO-1基因修饰间充质干细胞在肺损伤中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	田光	中国人民解放军海军总医院医务部	7	16	2.0	4.0
2	陈旭昕	中国人民解放军海军总医院呼吸内科	20	41	4.0	5.0
3	汪文婧	安徽医科大学海军临床学院	2	3	1.0	1.0