兔抗肠道病毒71型截短VP1抗体的制备及鉴定

• 作者: 任富利 周辉 孟胜利 王泽鋆 申硕
• 来源期刊: 微生物学免疫学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 肠道病毒71型 截短VP1 多克隆抗体 原核表达
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 14-18
• 页数: 5页
• 分类号: R392
• 字数: 4114字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13309/j.cnki.pmi.2016.03.003

摘要

目的：制备兔抗肠道病毒71型(EV71)截短VP1多克隆抗体,为EV71基础研究奠定基础。方法 RT-PCR扩增EV71VP1-N160基因(480 bp),以pGEX-6p-1为表达载体,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-VP1-N160,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达GST-VP1-N160融合蛋白,并对其进行纯化。以纯化的GST-VP1-N160融合蛋白作为免疫原,经背部皮下免疫新西兰大耳白兔,制备多克隆抗体,ELISA检测多克隆抗体效价,间接免疫荧光法和免疫印迹检测抗体特异性。结果经双酶切鉴定,表明重组表达质粒pGEX-6p-1-VP1-N160构建正确；GST-VP1-N160融合蛋白相对分子质量为35000~55000,主要为不可溶性包涵体形式,其在大肠杆菌中高效表达；纯化后目的蛋白纯度约为95%,蛋白质量浓度1.9 mg/mL；免疫家兔后,免疫血清效价可达1012,抗VP1-N160多克隆抗体可以识别EV71原核表达的重组蛋白及天然病毒抗原中的VP1,特异性好。结论成功制备了抗EV71截短VP1多克隆抗体。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孟胜利	武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究一室	35	63	4.0	6.0
2	申硕	武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究一室	7	7	1.0	2.0
3	王泽鋆	武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究一室	6	5	1.0	1.0
4	任富利	武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究一室	2	1	1.0	1.0
5	周辉	武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究一室	3	3	1.0	1.0