hVDAC 1蛋白在大肠杆菌中的表达纯化及其结构功能的初步表征

• 作者: 华子春 吕万胜 吴先登 朱伶俐 王泽南 郑伟娟 郭文洁 高静
• 来源期刊: 南京大学学报（自然科学版）
• 学科: 工学
• 关键词: 电压依赖性阴离子通道蛋白 原核表达 圆二色谱 脂质体
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 页码范围: 609-618
• 页数: 10页
• 分类号: TP181
• 字数: 6454字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13232/j.cnki.jnju.2016.04.005

摘要

电压依赖性阴离子通道蛋白(VDAC)是线粒体外膜上最丰富的蛋白,在调节线粒体的物质代谢与能量代谢、以及线粒体介导的细胞凋亡中起重要作用,因而与肿瘤及神经退行性疾病的发生密切相关.VDAC1是三种VDAC变体中表达量最高、分布最广泛的一种.由于 VDAC1的高度保守性,因此成为多种疾病治疗包括抗肿瘤治疗的理想靶点.获得足量的 VDAC1蛋白是进一步研究其结构功能、筛选与 VDAC1相互作用的药物分子的基础.从生物样品中直接分离纯化 VDAC1,不仅条件苛刻,而且得率很低.因此利用DNA重组技术在大肠杆菌中重组表达VDAC1是获得足量蛋白、用于后续研究的重要途径.成功构建了C端带有 His-tag的hVDAC1的重组蛋白原核表达质粒 pET28a/hVDAC1,在大肠杆菌中以包涵体形式表达,并通过盐酸胍变性、在变性条件下通过 NTA-Ni 亲和层析柱纯化蛋白后进行复性的方法,获得了高纯度的 hVDAC1.圆二色谱检测显示该蛋白二级结构以β-折叠为主、符合 hVDAC1的二级结构特征.利用流式细胞仪检测结果显示：FITC 荧光标记的 hVDAC1可以与脂质体膜、细胞膜特异性结合.证明克隆表达纯化的 hVDAC1具有特征的膜蛋白结构和功能,为体外筛选与 hVDAC1相互作用的各类分子奠定了基础.