小鼠IL-35基因毕赤酵母表达载体的构建及表达

• 作者: 唐媛媛 朱平 邸大琳 鞠吉雨 魏兵
• 来源期刊: 微生物学免疫学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠白介素-35 构建 毕赤酵母 分泌表达
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 26-29
• 页数: 4页
• 分类号: R392.12
• 字数: 3325字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13309/j.cnki.pmi.2016.05.005

摘要

目的：构建真核酵母表达载体 pPIC9K 与小鼠 IL-35基因的重组质粒 pPIC9K- mIL-35-His,在毕赤酵母GS115菌株中诱导表达,并对其进行鉴定。方法以pET-30a-mIL-35为模板,用PCR扩增出IL-35去信号肽基因全序列,并在3′端引入His标签,构建重组质粒pPIC9K- mIL-35-His,经SalⅠ线性化重组质粒后,用电穿孔方法将该基因转染毕赤酵母细胞内。经G418梯度筛选高拷贝转化子,筛选Mut+表型后经PCR进一步鉴定IL-35基因与酵母染色体是否整合。小量诱导表达筛选出高表达菌株,大量甲醇诱导表达,以 SDS-PAGE及免疫印迹( Western blot)鉴定蛋白表达。结果小鼠IL-35基因真核酵母表达载体pPIC9K- mIL-35-His构建成功,并且在GS115中通过甲醇诱导表达,经SDS-PAGE及Western blot分析,可见相对分子质量约为65000的目的蛋白。结论实验所构建的重组质粒pPIC9K-mIL-35-His可在毕赤酵母GS115中正确的表达小鼠IL-35基因。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	鞠吉雨	潍坊医学院免疫学教研室	39	101	5.0	8.0
2	唐媛媛	潍坊医学院免疫学教研室	6	43	2.0	6.0
4	魏兵	潍坊医学院免疫学教研室	11	34	4.0	5.0
7	朱平	潍坊医学院免疫学教研室	4	60	3.0	4.0
8	邸大琳	潍坊医学院免疫学教研室	25	97	5.0	8.0