籽用西瓜SCoT-PCR反应体系优化及引物筛选

• 作者: 杨静 王萍 石磊
• 来源期刊: 西北农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 籽用西瓜 SCoT-PCR 体系优化 正交设计
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 889-896
• 页数: 8页
• 分类号: S651
• 字数: 6784字
• 语种: 中文

摘要

采用L25(56)正交试验设计,对影响目标起始密码子多态性-聚合酶链式反应(SCoT-PCR)的5个因素(Taq酶用量、Mg2浓度、模板DNA用量、dNTPs浓度和引物浓度)进行优化试验,建立了籽用西瓜SCoT-PCR反应体系:Mg2+2.5 mmol·L-1、dNTPs 0.15 mmol·L-1、Taq酶1.5U、引物0.5μmol· L-1、模板DNA 20 ng,总体积20μL.比较各因素对扩增反应的结果,其中以Mg2+浓度的影响最大,Taq酶用量的影响最小.应用22个籽用西瓜品种验证该体系稳定可靠,并从41个SCoT引物中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的22个引物,并逐一筛选出最适退火温度.该反应体系的建立为今后利用SCoT标记技术对籽用西瓜种质遗传多样性评价、指纹图谱构建、种质鉴定、分子标记辅助选择育种等研究提供了新的技术手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨静	内蒙古农业大学农学院内蒙古野生蔬菜种质资源与创新重点实验室	41	607	16.0	24.0
2	王萍	内蒙古农业大学农学院内蒙古野生蔬菜种质资源与创新重点实验室	42	624	13.0	24.0
3	石磊	内蒙古农业大学农学院内蒙古野生蔬菜种质资源与创新重点实验室	13	28	3.0	5.0