FOXO1真核表达载体构建及其对TNF-α介导的A549细胞凋亡的影响

• 作者: 李理 袁伟锋 赵立媛 黄文杰
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: FOXO1 真核表达质粒 TNF-α Apoptosis Bim
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 527-531
• 页数: 5页
• 分类号: R392.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.13431/j.cnki.immunol.j.20160103

摘要

目的 构建FOXO1真核表达质粒,明确FOXO1对TNF-α介导的Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡的影响及其可能存在的调控机制.方法 根据GenBank中人FOXO1CDS序列设计并合成引物,提取A549细胞总RNA,通过RT-PCR获得FOXO1目的基因片段;通过酶切、连接,构建GV230-FOXO1真核表达质粒并进行测序分析鉴定;经鉴定后的表达载体瞬时转染入A549细胞,荧光显微镜及Western blot法检验FOXO1蛋白表达.体外培养A549细胞,利用脂质体LipofectamineTM 2000将本次合成的GV230-FOX01质粒转染入A549细胞,给予10 ng/ml TNF-α刺激24 h,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白Bim的表达.结果 成功构建GV230-FOXO1荧光真核表达质粒;FOXO1组细胞凋亡率明显高于TNF-α组和阴性对照组(P＜0.05),FOX01组蛋白Bim的表达明显高于TNF-α组和阴性对照组(P＜0.05).结论 FOXO1在TNF-α介导的A549细胞损伤中起促进细胞凋亡的作用,其作用机制可能为通过上调促凋亡蛋白Bim的表达,从而促进细胞凋亡.