应用 CRISPR／Cas9系统靶向切割细胞内乙型肝炎病毒基因组的研究

• 作者: 丛旭 潘孝本 韩进超 魏来 鲁宇青
• 来源期刊: 中华实验和临床病毒学杂志
• 关键词: 肝炎,乙型 共价闭合环状DNA CRISPR/Cas9 基因 抗病毒
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 53-57
• 页数: 5页
• 字数: 3097字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2016.01.014

摘要

目的：应用近年发展的基因编辑技术成簇规律间隔短回文重复序列（ clustered regularly interspaced short palindromic repeat， CRISPR）引导的Cas9核酸酶特异性靶向切割HBV DNA基因。方法基于慢病毒载体的lentiCRISPRv2系统，我们设计了3个特异靶向HBV基因组的向导RNA序列（ guide RNA， gRNA）。质粒pUC18－HBV1.2和lentiCRISPR-gRNAs共转染HepG2细胞，或lentiCRISPR-gRNAs与相关慢病毒载体转染293T细胞后产生相应慢病毒。用慢病毒处理整合了HBV DNA的HepG2.2.15细胞或者HepDE19细胞系；并用慢病毒处理基于C57BL／6小鼠腺相关病毒HBV复制模型。结果单靶向CRISPR／Cas9切割可以抑制30％～50％病毒蛋白产生。两个或三个靶向切割则显著提高抑制效率，可达70％～90％。以慢病毒体系处理HepG2.2.15或HepDES19细胞时， HepDES19细胞中HBeAg下降幅度约为HepG2.2.15细胞中的3倍。 HBV复制小鼠模型在CRISPR／Cas9慢病毒处理后，血清中HBsAg和HBeAg可转为阴性。结论 CRISPR／Cas9系统多位点靶向切割可高效清除细胞内基因组，相对于整合于染色体的基因组，游离于细胞核的HBV基因组对此靶向切割系统更加敏感。