荧光扫描法快速检测肽核酸分子信标标记的单增李斯特菌

• 作者: 吴姗 帅江冰 张晓峰 李可 虞惠贞 金晨晨
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: 肽核酸荧光原位杂交 分子信标 荧光扫描 单增李斯特菌
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1105-1112
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20150431

摘要

[目的]建立了单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes,单增李斯特菌)的肽核酸(Peptide nucleic acid,PNA)分子信标(Molecular beacon)的荧光扫描检测方法,以简化普通PNA原位荧光杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)检测方法中显微镜观察步骤.[方法]在具有单增李斯特菌特异性的肽核酸探针的5′和3′分别标记报告荧光基团和淬灭基团形成分子信标PNA探针,利用FISH技术和荧光扫描技术对单增李斯特菌进行检测.[结果]用普通PNA探针进行荧光扫描检测时,以N1处理为空白对照,假阳性率11.4％,假阴性率为0;以N2处理为空白时,假阳性率降低至4.3％,但假阴性率上升为18.6％.用分子信标PNA探针进行检测时,用N1为空白对照时,假阳性率8.6％,假阴性率为1.4％;以N2处理作为空白时,假阳性率5.7％,假阴性率为1.4％.与普通探针比较,分子信标PNA探针能有效减少假阳性和假阴性的发生.2种普通PNA探针的杂交成功率分别为83.3％和95.2％;2种“分子信标化”的肽核酸探针的成功率分别为91.7％和90.5％,表明探针两端标记并不会降低与目标菌的杂交成功率.[结论]将液相PNA-FISH和荧光扫描技术结合,通过大通量快速的荧光扫描检测可大幅提高检测效率.同时将肽核酸探针分子信标化,有效的降低了荧光扫描结果的假阳性,并通过了N1和N2两种空白对照处理把假阴性控制在较低的范围.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	帅江冰		10	1	1.0	1.0
2	张晓峰		15	6	2.0	2.0
3	吴姗		12	4	1.0	1.0
4	虞惠贞		7	3	1.0	1.0
5	金晨晨		3	1	1.0	1.0
6	李可		5	18	1.0	4.0