多重环介导等温扩增快速检测沙门菌、副溶血弧菌和单核细胞增生性李斯特菌方法的建立

• 作者: 刘威 刘宁伟 敖大 杨展 董德荣 贺晓明 邹大阳 黄思妺 黄留玉
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 多重LAMP 沙门菌 副溶血弧菌 单核细胞增生性李斯特菌
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 767-772
• 页数: 6页
• 分类号: R378
• 字数: 4856字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2016.09.018

摘要

目的：建立能够同时检测沙门菌、副溶血弧菌（VPH）和单核细胞增生性李斯特菌（LM）的多重环介导等温扩增（mLAMP）方法。方法分别针对沙门菌 bcfD 基因、VPH 的 tlh 基因和 LM的 iap 基因设计 mLAMP 引物，以LAMP 进行单重 LAMP 检测。实时浊度监测扩增结果，优化引物浓度配比，进而建立此3种食源性致病菌的mLAMP 检测体系，以 PCR 检测灵敏性作为比较，进行特异性和灵敏性分析。结果实时浊度监测表明，该 mLAMP体系具有良好特异性，可在45 min 内一次性检测以上3种致病菌，且无非特异扩增产生。这3种菌的检测最低限分别为300 fg／μl、4．2 pg／μl 和4．5 pg／μl，与 PCR 检测灵敏度相当。结论该多重 LAMP 可同时检测食品中的沙门菌、VPH 和 LM，可作为大规模样品的初筛或传统方法的辅助方法，用于快速判定样品中是否含有这3种致病菌。