重组人白细胞介素-13在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定

• 作者: 丁玉梅 刘春凤 尹凤红 林辉煌 陈清西
• 来源期刊: 厦门大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组人白细胞介素-13(rhIL-13) 表达 纯化 鉴定
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 836-841
• 页数: 6页
• 分类号: Q356.1
• 字数: 5228字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6043/j.issn.0438-0479.201601013

摘要

采用大肠杆菌(Escherichia coli)作为宿主,通过300 L发酵罐进行中试发酵表达重组人白细胞介素-13(rhIL-13)融合蛋白；经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导,离心发酵液收集菌体,菌体经溶解、变性、稀释复性及亲和层析捕获,获得融合蛋白；融合蛋白经肠激酶酶切后,再经亲和层析分离和分子筛精细纯化等步骤,获得高纯度 rhIL-13原液.每升发酵液可获得高纯度的 rhIL-13原液约30 mg.通过本纯化工艺获得的 rhIL-13原液经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法检测,纯度大于98.75%；经高效液相色谱分子排阻(HPLC-SEC)法检测,纯度为100%；质谱(MS)法测定 rhIL-13分子质量为12348 u,与理论值基本一致；采用噻唑蓝(MTT)法进行比活性检测,比活大于8.0×106 IU/mg；采用 HPLC-SEC法和MS法对rhIL-13二硫键数目和位置进行分析,结果显示二硫键数目和位置与理论一致.此操作方法可获得高纯度、高活性的 rhIL-13原液,并且操作简单,易于放大,可实现工业化规模生产.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈清西	厦门大学生命科学学院	114	2033	24.0	40.0
2	尹凤红		2	1	1.0	1.0
3	丁玉梅	厦门大学生命科学学院	3	5	2.0	2.0
4	刘春凤		2	2	1.0	1.0
5	林辉煌	厦门大学生命科学学院	2	3	1.0	1.0