大豆翻译延伸因子GmEF1A干扰载体的构建及大豆遗传转化

• 作者: 丁雪妮 宋英培 廖文林 智海剑 栾鹤翔 殷金龙 牛浩鹏 高乐
• 来源期刊: 大豆科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 大豆花叶病毒 GmeEF1A基因 RNAi GATEWAY技术 农杆菌介导大豆遗传转化
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 遗传育种·分子生物学
• 页码范围: 902-910
• 分类号: Q782
• 语种: 中文
• DOI: 10.11861/j.issn.1000-9841.2016.06.0902

摘要

研究发现GmeEF1A与大豆花叶病毒的P3蛋白存在互作关系,并且参与SMV在大豆体内的繁殖.通过大豆GmeEF1A基因5个拷贝的核苷酸和氨基酸序列比对,确定其保守区间,克隆得到180 bp的干扰片段GmeEF1Ai.利用GATEWAY技术构建RNA干扰(RNA interference,RNAi)表达载体pB7GWIWG2 (Ⅱ)-eEF1 Ai,并通过农杆菌介导的子叶节转化法导入到受体大豆品种天隆1号中.测序结果显示重组质粒中插入的干扰片段GmeEF1Ai与目标序列完全符合,通过PCR和酶切验证表明GmeEF1 Ai是以反向重复形式插入到表达载体中.经转化获得组培苗8株,PCR、除草剂涂抹和PAT/bar试纸条多重检测确认7株为阳性.绝对荧光定量结果显示,阳性苗中4株为单拷贝.GmeEF1A基因表达量分析结果显示GmeEF1Ai载体对GmeEF1A的5个拷贝基因有不同程度的阻抑.这不仅为验证GmeEF 1A基因在大豆受SMV侵染时的功能提供试验材料,也为大豆抗病育种提供新的种质.