人－鼠嵌合单链抗体的构建及其在大肠杆菌中的高效可溶性表达和发酵条件优化

• 作者: 刘萌 孙杨 杨艳坤 白仲虎
• 来源期刊: 生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 人源化嵌合抗体 scFv 可溶性表达 酶联免疫吸附 发酵条件优化
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 5255字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1736.2016.06.001

摘要

从人血清白蛋白HSA 免疫小鼠制备的杂交瘤单克隆抗体细胞中提取总RNA，通过反转录得到cDNA，经RT-PCR的方法扩增出单克隆抗体的重链可变区VH和轻链可变区VL的DNA编码序列，通过基因重组的方法将鼠源Fab段VH和VL与人源Fab段重链和轻链恒定区进行嵌合，获得人源化嵌合单链抗体（ Single-chain Antibody Fragment ， scFv），将scFv克隆到构建的表达载体pBY中导入到宿主菌BL21-trxB（ DE3）中进行可溶性表达，在摇瓶水平通过对发酵条件进行优化，胞内可溶性表达量达到1.23 gL／，在此基础上进行反应器放大培养，对关键参数进行优化，scFv表达量达到2.49g ／L。通过人源化嵌合抗体的构建表达并完成了小试水平的研究，为进一步开发人源化单链抗体提供了方法和研究基础。