NKAIN 2真核表达载体的构建与表达鉴定

• 作者: 吕永杰 周柏伟 罗飞 赵善超 黄梦怡
• 来源期刊: 医学研究生学报
• 学科: 医学
• 关键词: NKAIN2 抑癌基因 真核细胞 载体构建
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 论著 -- 基础研究
• 页码范围: 1163-1166
• 页数: 4页
• 分类号: R737.25
• 字数: 3070字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16571/j.cnki.1008-8199.2016.11.010

摘要

目的： NKAIN2基因位于6号染色体长臂，6号染色体长臂的缺失现象经常发生于各种肿瘤。现构建候选抑癌基因NKAIN2真核表达载体，使其在前列腺癌细胞22RV1中过表达并观察其细胞定位，为进一步功能研究奠定实验基础。方法采用PCR方法扩增NKAIN2基因序列，将其重组于pcDNA4载体中，利用PCR和DNA测序鉴定克隆正确性；并转染到22RV1细胞，Western blot检测其蛋白表达，免疫荧光检测其在细胞中的定位。结果重组质粒中插入正确目的片段，片段大小为627 bp，与预计位置相符。 Western blot 检测表明，在25000处检测到目的蛋白条带，与预计大小相符，而阴性对照未检测到相应条带，说明真核表达载体成功转染细胞，并且能够瞬时表达。转染了pcDNA4-FLAG-NKAIN2质粒的22RV1细胞在Petri皿培养24 h后可测到转染的带FLAG-NKAIN2片段的蛋白表达，且过表达的蛋白主要定位于细胞膜和细胞质中。转染未带FLAG标签的pcDNA4质粒未检测到蛋白荧光信号。结论成功构建了pcDNA4-FLAG-NKAIN2真核表达载体，转染22RV1细胞后高表达，为进一步研究NKAIN2在前列腺癌中的生物行为和其发生发展的相互作用机制提供基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵善超	南方医科大学南方医院泌尿外科	59	382	8.0	18.0
2	罗飞	南方医科大学南方医院泌尿外科	2	1	1.0	1.0
3	周柏伟	南方医科大学南方医院泌尿外科	2	1	1.0	1.0