A型肉毒毒素轻链蛋白的表达及纯化

• 作者: 付玉和 侯天全 吴广谋 岳玉环 张国利 张培培 徐艳玲 田园 赵鑫
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: A型肉毒毒素轻链 大肠埃希菌 基因表达 纯化
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 469-472
• 分类号: R378.8+3|Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 构建A型肉毒毒素轻链表达载体重组质粒,在大肠埃希菌中表达后,利用金属螯合层析柱纯化.方法 以pGEM-BoNT/AL轻链质粒为模板,PCR扩增BoNT/AL基因,克隆至表达载体pET-28(a)中,构建重组质粒pET-28(a)-BoNT/AL,转化E coli BL21(DE3),分别于37、30、25℃IPTG诱导表达,表达产物经Chelating Sepharose 4Fast Flow(Cu2+)层析柱纯化,纯化产物经尿素梯度复性.结果 质粒pET-28(a)-BoNT/AL经酶切鉴定及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约52 000,主要以包涵体形式存在,37℃诱导表达量最高,占菌体沉淀总蛋白的41％;包涵体经2％ Trition-X100和2 mol/L尿素洗涤后,可去除部分杂蛋白,8 mol/L尿素能溶解大部分包涵体;经再次浓缩后,蛋白浓度可达89μg/m1,纯度达90％.结论 成功克隆及表达了BoNT/A轻链基因,为制备抗BoNT/A轻链单链抗体以及研究肉毒中毒机制和治疗方案奠定了基础.