A型猪流感病毒TaqMan探针荧光RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 张俊哲 王乃福 王建华 王玉玲 肖妍 董志珍 谭旭菲 赵丹 赵祥平 陈小金 陈本龙
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: A型猪流感病毒 TaqMan探针 荧光RT-PCR
• 年，卷（期）: 2016,（12）
• 页码范围: 85-88
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65
• 字数: 3180字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2016.12.023

摘要

根据A型猪流感病毒（SIV）的基质蛋白（M）编码基因保守序列设计合成一对特异性引物和一条TaqMan探针，建立了一种检测A型SIV的荧光RT-PCR方法。结果显示，该方法对H1N1、H3N2和H9N2亚型SIV均呈特异性扩增，对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒等猪的其他常见病毒无交叉扩增反应；该方法对M基因RNA对照（SIV-M-RNA）的最适线性检测范围为3.8×101~3.8×108拷贝数/反应，标准曲线方程为Y=-3.4365X+40.091，相关系数（R2）为0.9998，最低检出限为38个拷贝数的SIV-M-RNA。对3个不同浓度（3.8×103~3.8×105 copies/μL）的SIV-M-RNA进行组间和组内重复试验，每个浓度的Ct值变异系数均小于1.5%，具有良好的重现性。用该方法对860份进口猪的鼻拭子样本和78份国内猪场猪鼻拭子样本进行SIV检测，结果进口猪鼻拭子样本的SIV检测均为阴性，17份国内猪场猪鼻拭子样本SIV检测为阳性。本研究提供了一种快速、敏感和特异的A型猪流感病毒检测方法。