人microRNA-21真核过表达载体的构建及其在 HepG2．2．15细胞中上调c-myc基因的表达

• 作者: 任广立 张卫云 林永敏 蔡启茵 谢聪 马恒颢
• 来源期刊: 重庆医学
• 学科: 医学
• 关键词: 微RNA-21 遗传载体 基因 ,c-myc 乙型肝炎相关性肝肿瘤 HepG2 .2 .15细胞
• 年，卷（期）: 2016,（12）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 1601-1604
• 页数: 4页
• 分类号: R512.62
• 字数: 3211字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8348.2016.12.006

摘要

目的：构建人微小RNA‐21（microRNA‐21，miRNA‐21）真核过表达载体pmR‐21，探讨其在 HepG2．2．15细胞中对c‐myc基因表达的调控作用。方法 PCR扩增miRNA‐21的前体基因片段（pre‐miRNA‐21），双酶切后连接到pmR‐mCherry载体上，通过双酶切和测序验证重组载体的准确性；将重组载体转染到 HepG2．2．15细胞中为实验组，另设空载体组（转染 pmR‐mCherry空质粒组），空白组（未转染组），阳性对照组（HepG2细胞），24 h后观察载体荧光蛋白表达情况，流式细胞术检测转染效率，实时荧光定量PCR评估miRNA‐21的表达情况；转染72 h后，RT‐PCR和Western blot检测c‐myc mRNA及蛋白表达水平；CCK‐8法检测各组细胞增殖情况。结果经双酶切和测序验证，目的基因片段插入载体中；实验组及空载体组转染24 h后细胞内可见强荧光，转染效率大于50％；实验组细胞 miRNA‐21表达较空载体组、空白组水平升高；转染72 h后实验组细胞c‐myc mRNA表达较空载体组、空白组升高；实验组细胞增殖快于空载体组及空白组，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论成功构建miRNA‐21真核过表达载体 pmR‐21，该重组载体可稳定表达 miRNA‐21；miRNA‐21可上调 c‐myc基因的表达，c‐myc基因是miRNA‐21发挥促癌作用的靶点之一。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张卫云	南方医科大学附属广州军区广州总医院检验科	2	3	1.0	1.0
2	林永敏	南方医科大学附属广州军区广州总医院儿科	1	0	0.0	0.0
3	任广立	南方医科大学附属广州军区广州总医院儿科	1	0	0.0	0.0
4	蔡启茵	南方医科大学附属广州军区广州总医院儿科	1	0	0.0	0.0
5	谢聪	南方医科大学附属广州军区广州总医院儿科	1	0	0.0	0.0
6	马恒颢	南方医科大学附属广州军区广州总医院儿科	1	0	0.0	0.0