山羊 PRNP 基因启动子转录活性研究

• 作者: 周荣艳 张振红 李兰会 锡建中 陈辉 高立杰 魏彦辉
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 山羊 PRNP 基因 启动子 转录活性
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 畜牧?兽医?资源昆虫
• 页码范围: 1990-1997
• 页数: 8页
• 字数: 3980字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2016.10.014

摘要

【目的】分析山羊 PRNP 基因启动子活性区域，旨在筛选调节朊蛋白表达水平的关键区域或转录因子，为阐明山羊 PRNP 基因的表达调控提供理论依据，并为从遗传学角度降低朊蛋白病的发生提供思路；【方法】以山羊 PRNP 基因序列（GenBank 登录号：EU870890）为模板，设计特异性引物，扩增山羊 PRNP 基因5′侧翼区片段，并将扩增片段克隆至 pEASY-T3载体，鉴定为阳性的克隆进行测序；利用生物信息学方法和在线工具进行启动子区域和转录因子结合位点的预测；利用缺失突变技术扩增启动子区不同长度的片段11个，并克隆至 pEASY-T3载体后，鉴定为阳性的质粒和 pGL3-Basic 载体分别用限制性内切酶 Mlu I 和 Bgl II 进行酶切，并回收酶切产物；利用 T4连接酶进行目的片段与 pGL3-Basic 连接，鉴定为阳性的荧光素酶报告基因重组质粒进行测序，并提取无内毒素质粒，用脂质体转染法瞬时转染至 SH-SY5Y 细胞，转染48h 后，利用双荧光素酶检测试剂盒进行各缺失突变重组质粒在细胞内的启动活性检测；【结果】成功克隆了山羊 PRNP 基因5′侧翼区片段，长度为2332 bp，且该片段含有预测的启动子活性区域、保守的 motifs 和多个转录因子的结合位点；成功克隆了11个含有不同长度启动子的片段，并与荧光素酶报告基因连接，并构建了目的片段与荧光素酶报告基因的重组质粒；转染时脂质体与 DNA的比例为1﹕0.5，萤火虫荧光素酶载体与海肾荧光素酶比例为50﹕1；山羊 PRNP 基因5′侧翼区存在着核心启动子，启动子活性最强的区域为-519—+82 bp，且在-220—+59 bp 这一区域存在着正调控元件，外显子1对启动子活性中起重要的调控作用；4个 motifs 可能为正调控元件结合位点；在强启动子活性区存在10个 Sp1结合位点，2个AP-2 alpha 结合位点和1个 AP-1结合位点；山羊 PRNP 基因 motif 3和 motif 4分别预测为转录因子 Foxp3和 COE 1的结合位点。【结论】确定了山羊 PRNP 基因启动子的核心区域（-519—+82bp），外显子1对启动子活性起重要的调控作用。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈辉	河北农业大学动物科技学院	149	765	14.0	21.0
2	高立杰	河北农业大学动物科技学院	44	238	9.0	13.0
3	张振红	河北农业大学动物科技学院	73	368	11.0	16.0
4	锡建中	河北农业大学动物科技学院	44	93	5.0	7.0
5	李兰会	河北农业大学动物科技学院	120	583	13.0	17.0
6	周荣艳	河北农业大学动物科技学院	105	307	9.0	11.0
7	魏彦辉	河北农业大学动物科技学院	11	23	3.0	4.0