SOX6基因3'UTR区野生型和突变型重组质粒的构建与鉴定

• 作者: 张燕 朱东丽 杨铁林 郭燕 闫菡
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: SOX6基因 单核苷酸多态性 3'非编码区 双荧光素酶报告基因 微小RNA
• 年，卷（期）: 2016,（22）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 4201-4206
• 分类号: Q782
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2016.22.001

摘要

目的:构建含单核苷酸多态性(SNP)位点rs1065024的SOX6基因3'UTR双荧光素酶报告基因载体,并用生物信息学软件预测与rs1065024位点区域相结合的miRNA,为进一步研究此SNP位点的功能及miRNA与SOX6基因3'UTR区之间的关系奠定基础.方法:提取人全血基因组DNA,以基因组DNA为模板,通过PCR扩增含SNP位点在内的SOX6基因3’UTR片段,经过胶回收纯化后,将回收的目的片段插入双荧光素酶报告基因载体pMIR-REPORT中,再经DH5a转化扩增,挑单克隆进行菌落PCR并进行质粒提取,对质粒进行双酶切鉴定,最后进行DNA测序鉴定.针对SNP进行定点突变,构建出野生型和突变型重组质粒,并用生物信息学软件预测出与SNP位点相结合的miRNA.结果:经单菌落质粒测序验证显示带有T碱基的SOX6基因3’UTR重组质粒pMIR-REPORT-3'UTR-T构建成功;经定点突变,成功将pMIR-REPORT-3'UTR-T质粒转变为pMIR-REPORT-3'UTR-C,经比对未引入任何其他突变;生物信息学预测显示,rs1065024位点位于miR-190b、miR-190a-5p、miR-451b、miR-4791与SOX6基因3'UTR的结合区域,其多态的改变可以影响miRNA与mRNA的结合效率.结论:本研究成功构建了含SNP位点rs1065024的pMIR-REPORT-SOX6-3'UTR野生型和突变型重组质粒,为今后SOX6基因3'UTR的SNP位点的功能及miRNA与SOX6基因3'UTR区之间的关系研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭燕	西安交通大学生命科学与技术学院生物医学信息工程教育部重点实验室	18	99	5.0	9.0
2	张燕	西安交通大学第一附属医院转化医学中心	22	61	4.0	7.0
3	朱东丽	西安交通大学生命科学与技术学院生物医学信息工程教育部重点实验室	2	1	1.0	1.0
4	闫菡	西安交通大学生命科学与技术学院生物医学信息工程教育部重点实验室	3	15	2.0	3.0
5	杨铁林	西安交通大学生命科学与技术学院生物医学信息工程教育部重点实验室	4	3	1.0	1.0