pmCherry-C1-Argonaute1重组质粒的构建及鉴定

• 作者: 付雪 任媛媛 崔晓腾 张春燕 杨洁 苏超 高星杰
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 生物学
• 关键词: 人类Argonaute1蛋白 pmCherry-C1 重组质粒 融合蛋白 应激颗粒
• 年，卷（期）: 2016,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 9-12
• 页数: 4页
• 分类号: Q591.2|Q784
• 字数: 3199字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2016.12.003

摘要

目的 构建并鉴定pmCherry-C1-Argonaute1重组质粒,为深入研究Argonaute1蛋白在细胞应激及相关疾病的生物学作用奠定基础.方法 提取HeLa细胞总RNA,反转录出含Argonaute1的cDNA;以Argonaute1 cDNA为模板,采用PCR法扩增出带有EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切的目的基因;采用双酶切法将目的片段连接到pmCherry-C1载体上;将构建成功的pmCherry-C1-Argonaute1重组质粒转染入HeLa细胞内,以Western blotting法检测Argonaute1与樱桃红(Cherry)蛋白的融合表达情况;以激光共聚焦显微镜观察细胞内Argonaute1蛋白与细胞应激颗粒的标记蛋白(G3BP)及加工体的标记蛋白(DCP1α)的应激共定位关系.结果 以EcoRⅠ、BamHⅠ单、双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒无误;融合蛋白表达阳性;当细胞受到应激时,Argonaute1蛋白与G3BP、DCP1α蛋白共定位.结论 本研究成功构建重组pmCherry-C1-Argonaute1质粒.该质粒可有效表达Cherry标记的Argonaute1融合蛋白,有助于深入研究Argonaute1蛋白在细胞应激及相关疾病领域的生物学作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨洁		56	151	7.0	10.0
2	付雪		10	10	2.0	2.0
3	高星杰		18	24	3.0	3.0
4	张春燕		9	25	2.0	5.0
5	任媛媛		10	10	2.0	3.0
6	苏超		11	8	2.0	2.0
7	崔晓腾		5	9	2.0	3.0