人LDH-B基因克隆及其真核表达载体的构建

• 作者: 卿鑫 曾凡才 胡湘麟
• 来源期刊: 现代医药卫生
• 关键词: L鄄乳酸脱氢酶 基因 克隆,分子 遗传载体 真核细胞
• 年，卷（期）: 2016,（20）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 3106-3108,3112
• 页数: 4页
• 字数: 4077字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-5519.2016.20.004

摘要

目的：克隆人乳酸脱氢酶B（LDH-B）基因并构建其真核表达载体。方法提取人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的总RNA，逆转录生成cDNA，以cDNA为模板，采用PCR 扩增获得LDH-B基因编码区序列片段，限制性核酸内切酶Bam HⅠ和KpnⅠ双酶切LDH-B基因片段及pUC19质粒，连接反应构建pUC19-LDH-B克隆载体，并将其转入大肠埃希菌DH5α感受态细胞，蓝白筛选挑取白色菌落，酶切验证后测序鉴定。将序列正确的LDH-B基因亚克隆到pcDNA3.1（-）载体上，构建LDH-B真核表达载体pcDNA3.1（-）-LDH-B。结果 PCR扩增后可见约1.0 kb的特异性条带，与预期的LDH-B片段长度相符合；Bam HⅠ和KpnⅠ双酶切pUC19-LDH-B后可见约2.6 kb 和1.0 kb 的条带，分别与pUC19和LDH-B的片段长度相符合，LDH-B 测序结果与 DNA 序列数据库（Genebank）中的参考序列相一致；Bam HⅠ和 KpnⅠ双酶切pcDNA3.1（-）-LDH-B后可见约5.5 kb和1.0 kb的条带，分别与pcDNA3.1（-）和LDH-B的片段长度相符合。结论成功克隆了人LDH-B基因，并构建了其真核表达载体，为进一步探究LDH-B的生物学功能奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曾凡才	西南医科大学生物化学与分子生物学实验室	7	2	1.0	1.0
2	胡湘麟	西南医科大学临床医学院	3	6	2.0	2.0
3	卿鑫	西南医科大学生物化学与分子生物学实验室	1	0	0.0	0.0