基于质粒标准品的HEV实时定量逆转录PCR检测方法的建立

• 作者: 付红伟 王静 耿家宝 胡志东 贺倩
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: HEV 质粒标准品 qRT-PCR RT-nPCR
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 应用技术
• 页码范围: 147-154
• 页数: 8页
• 字数: 7112字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2017.02.011

摘要

目的 建立戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)不同基因型RNA实时定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测方法及其所需质粒标准品,以利于临床一线实验室展开应用.方法 选取HEV ORF3高度保守区设计可检测HEV不同基因型病毒株的引物和探针;将拟扩增的HEV RNA目的基因片段构建成质粒,制备HEV质粒DNA标准品,用于浓度标准曲线及一步法qRT-PCR检测方法的建立;同时检测并分析HEV核酸与抗原和抗体之间的相关性;采用逆转录-巢式PCR(RT-nPCR)进行对比验证,并对部分阳性标本进行测序,通过生物进化树分析其流行病学特点.结果 成功建立基于HEV质粒标准品的qRT-PCR检测方法,适用于血清及粪便标本,最低检测限可达25拷贝/test;HEV核酸与抗原的检测结果具有较好的相关性,两者一致性达77.8%;经生物进化树分析发现9位HEV RNA阳性患者均感染为基因4型,但分属4a、4d和4n三个不同的基因亚型.结论 成功建立基于HEV质粒标准品的qRT-PCR检测方法,为后续临床应用商品化提供技术支持.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王静	天津医科大学总医院医学检验科	43	247	9.0	14.0
2	胡志东	天津医科大学总医院医学检验科	166	1353	20.0	30.0
3	付红伟	天津医科大学总医院医学检验科	6	11	1.0	3.0
4	耿家宝	中国人民解放军第八一医院全军肝病中心	2	1	1.0	1.0
5	贺倩	天津医科大学总医院医学检验科	4	7	2.0	2.0