布鲁氏菌BMEII0988基因的克隆、原核表达及免疫原性分析

• 作者: 印双红 唐红 张俊波 易德武 李志强 李默 郭飞 陈创夫
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 布鲁氏菌 BMEII0988基因 原核表达
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 129-134,197
• 页数: 7页
• 分类号: Q784
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2017.02.0022

摘要

[目的]检测布鲁氏菌BMEII0988基因的原核表达情况并对其免疫原性进行分析.[方法]以热灭活的布鲁氏菌16M标准株为模板,根据GenBank中公布的羊种布鲁氏菌16M的BMEII0988基因序列分别设计引物,用PCR方法扩增BMEII0988基因的编码序列,连接到T载体测序,将测序正确的基因序列克隆到原核表达载体pET-32a上,转化入大肠杆菌DE3感受态细胞中诱导表达,将获得的目标蛋白用AKTAxpress智能多维纯化系统进行纯化,并用WesternBlot分析其反应原性.[结果]BMEII0988基因长度为1 131 bp,编码377个氨基酸,SDS-PAGE表明BMEII 0988融合蛋白在大约66 kDa处出现条带,纯化后条带单一,BMEII 0988蛋白(NCBI标准序列号:WP_002966326.1)具有较好的反应原性.[结论]该研究为下一步建立相应蛋白标记的诊断方法和疫苗的研发奠定了基础.