新型隐球酵母U6启动子的鉴定、克隆及功能验证

• 作者: 朱旭东 朱项阳 王宇 肖婷婷 赵雪茹 魏东盛
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: 新型隐球酵母 CnU6启动子 shRNA CRISPR/Cas9
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 197-208
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20160206

摘要

[目的]鉴定及克隆新型隐球酵母(Cryptococcus neoformans)中Pol Ⅲ型的U6启动子(CnU6启动子),并验证CnU6启动子能否有效转录shRNA及CRISPR/Cas9系统中gRNA.[方法]结合GenBank数据库已公布的新型隐球酵母基因组信息和本实验室RNA-seq文库数据,利用生物信息学技术分析得到新型隐球酵母中具有高转录水平的U6 RNA序列.使用重叠PCR和EasyGeno方法将预测的CnU6启动子分别克隆到shRNA及gRNA的上游区域,通过观察shRNA对靶基因的RNAi效果及gRNA引导Cas9核酸酶对靶位点的切割结果,确定CnU6启动子能否转录短RNA.[结果]CnU6启动子能够转录形成shRNA对靶基因进行沉默,并且能转录形成gRNA引导Cas9核酸酶对靶点进行切割.[结论]新型隐球酵母的CnU6启动子被成功鉴定及克隆,它能有效驱动shRNA和gRNA的转录.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱旭东	南开大学生命科学学院	91	1022	14.0	31.0
3	魏东盛	南开大学生命科学学院	19	172	9.0	13.0
6	王宇	南开大学生命科学学院	5	6	2.0	2.0
7	朱项阳	南开大学生命科学学院	3	4	1.0	2.0
8	肖婷婷	南开大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
9	赵雪茹	南开大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0