番鸭呼肠孤病毒可视化RT-LAMP检测方法的建立

• 作者: 夏文龙 孟婷 崔平福 朱善元 王永娟
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 番鸭呼肠孤病毒 环介导等温扩增 可视化 快速检测
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 1321-1326
• 页数: 6页
• 分类号: S851.34+7.201
• 字数: 3548字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2017.06.018

摘要

为实现番鸭呼肠孤病毒的快速检测,本研究根据GenBank中公布的番鸭呼肠孤病毒σC蛋白基因的高度保守序列设计了4条引物,通过优化反应体系中各组分的浓度、反应时间和温度,建立了一种灵敏、便捷的RT-LAMP扩增方法.然后以鸭常见病毒基因组为模板,开展特异性检测,最后通过添加SYBR Green I荧光染料完成可视化LAMP检测方法的建立.结果显示:25μl LAMP反应体系,镁离子5×10-5 mmol,dNTP 1.25×10-5 mmol,Bst DNA聚合酶8 U,F3/B35×10-6μmol,FIP/BIP 3×10-5μmol,62℃,45 min为最优反应条件;在最佳条件下甜菜碱对反应体系影响不明显;对临床样品的阳性检出率与常规RT-PCR检测方法一致,但灵敏度高于PCR方法,最低检测限为10 pg,检测结果可直接通过肉眼观察来判断.该方法为番鸭呼肠孤病毒的可视化RT-LAMP快速检测试剂盒研制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	崔平福		6	10	2.0	2.0